Spino_00140 : CDS information

Location

Organism	Saccharopolyspora spinosa
Strain	NRRL 18538
Entry name	Spinosyn
Contig	AY007564
Start / Stop / Direction	18,501 / 17,749 / - [in whole cluster] 18,501 / 17,749 / - [in contig]
Location	complement(17749..18501) [in whole cluster] complement(17749..18501) [in contig]
Type	CDS
Length	753 bp (250 aa)

Annotation

Category	2.3 modification addition of sugar moiety
Product	L-rhamnose C-4' O-methyltransferase
Product (GenBank)	probable O-methyltransferase
Gene
Gene (GenBank)	spnH
EC number	2.1.1.-
Keyword	tri-O-methylrhamnose
Note
Note (GenBank)	involved in rhamnose O-methylation
Reference	ACC Q9ALM9 PmId [11358695] Cloning and analysis of the spinosad biosynthetic gene cluster of Saccharopolyspora spinosa. (Chem Biol. , 2001) [11386361] A cluster of genes for the biosynthesis of spinosyns, novel macrolide insect control agents produced by Saccharopolyspora spinosa. (Antonie Van Leeuwenhoek. , 2000) [18704529] SpnH from Saccharopolyspora spinosa encodes a rhamnosyl 4'-O-methyltransferase for biosynthesis of the insecticidal macrolide, spinosyn A. (J Ind Microbiol Biotechnol. , 2008) [20158237] Biosynthesis of spinosyn in Saccharopolyspora spinosa: synthesis of permethylated rhamnose and characterization of the functions of SpnH, SpnI, and SpnK. (J Am Chem Soc. , 2010) comment [PMID: 11358695](2001) spinosad biosynthetic gene clusterの報告。 spnH(251aa): rhamnose; O-methyl-transferase spnH不活化mutantはtri-O-methylrhamnose部分で2'-O-mehtylのみmethyl化されたspinosyn Pを産生。このmutantは4'-O-methyl基のないspinomycin Kからspinomycin Aへの変換ができない。よってspnH mutantは4'-O-methyltransferase活性を欠いている。以上から、SpnHはtri-O-methylrhamnose部分の合成過程で4位をMethyl化すると提唱される。 -- [PMID: 11386361](2000) 同じ著者らの先行論文。 spnH: Rhamnose methylation -- [PMID: 18704529](2008) tri-O-methylrhamnoseの4'-O-methylationを欠いたspinosyn Kを産生するmutant株NRRL 18743と、wild株NRRL 18539からspnHをクローニング、配列比較。 mutant株は高保存領域にG-165 → A-165へのアミノ酸置換をもたらす変異あり。両株由来spnHをE.coliで発現、精製、spinosyn Kを基質として活性確認。wild SpnHのみspinosyn Aへの変換可能。 wild spnHによる形質転換でmutant株はspinosyn A産生回復。よって、wild-type S.spinosa spnHによってコードされる酵素は、spinosyn Aの生合成において最終的なrhamnosyl methylation stepを担うrhamnosyl 4'-O-methyltransferaseであることが確立された。 -- [PMID: 20158237](2010) 使用しているのはNRRL 18537. rhamnose methyltransferasesとされるSpnH, SpnI, and SpnKの機能検証、そのpermethylation過程の役割を確認。 SpnH, SpnI, and SpnK がそれぞれrhamnose 4'-, 2'-, and 3'-O-methyltransferaseであることが確立された。これらの共通した基質は、rhamnoseが付加されたaglyconeである。また、SpnI→SpnK→SpnHという順番で働くこともわかっている。

Sequence

>L-rhamnose C-4' O-methyltransferase [probable O-methyltransferase]
MPSQNALYLDLLKKVLTNTIYSDRPHPNAWQDNTDYRQAARAKGTDWPTVAHTMIGLERL
DNLQHCVEAVLADGVPGDFAETGVWRGGACIFMRAVLQAFGDTGRTVWVVDSFQGMPESS
AQDHQADQAMALHEYNDVLGVSLETVRQNFARYGLLDEQVRFLPGWFRDTLPTAPIQELA
VLRLDGDLYESTMDSLRNLYPKLSPGGFVIIDDYFLPSCQDAVKGFRAELGITEPIHDID
GTGAYWRRSW

>L-rhamnose C-4' O-methyltransferase [probable O-methyltransferase]
ATGCCCTCCCAGAACGCGCTGTACCTGGACCTGCTCAAGAAGGTACTCACCAACACGATT
TACAGTGATCGGCCGCATCCGAACGCCTGGCAGGACAACACCGACTACAGGCAGGCCGCT
CGGGCCAAAGGCACGGACTGGCCAACTGTCGCGCACACGATGATCGGTCTGGAGCGGCTG
GACAACCTCCAGCACTGCGTGGAAGCCGTGCTCGCAGACGGTGTTCCCGGGGATTTCGCC
GAGACCGGTGTCTGGCGGGGCGGCGCATGCATCTTCATGCGCGCGGTTCTCCAGGCATTC
GGAGATACCGGACGTACCGTCTGGGTAGTGGATTCCTTCCAGGGAATGCCGGAAAGCTCT
GCGCAAGACCACCAAGCGGACCAGGCTATGGCGCTGCACGAGTACAACGACGTGCTTGGC
GTATCGCTTGAGACCGTCCGGCAGAACTTCGCCCGCTACGGGCTGCTCGACGAACAGGTC
AGGTTCCTCCCCGGCTGGTTCCGGGACACCTTGCCCACCGCCCCCATCCAGGAACTCGCC
GTGCTACGACTCGACGGCGACCTCTACGAATCCACAATGGACTCATTGCGGAACCTGTAC
CCGAAGCTCTCGCCGGGCGGATTCGTCATCATCGACGACTATTTTCTGCCGTCCTGCCAG
GACGCGGTGAAGGGGTTCCGCGCGGAACTCGGGATCACGGAACCCATCCACGACATCGAC
GGCACGGGCGCCTACTGGCGCCGCAGCTGGTGA

Feature

BLASTP Database:UniProtKB:2011_09	show BLAST table
InterPro Database:interpro:38.0	IPR008884 Macrocin-O-methyltransferase (Family) PF05711 TylF
SignalP	No significant hit
TMHMM	No significant hit

Spino_00130 Spino_00150