Ansam_00230 : CDS information

Location

Organism	Actinosynnema pretiosum subsp. auranticum
Strain	ATCC 31565
Entry name	Ansamitocin
Contig	AF453501
Start / Stop / Direction	39,480 / 41,684 / + [in whole cluster] 43,267 / 41,063 / - [in contig]
Location	39480..41684 [in whole cluster] complement(41063..43267) [in contig]
Type	CDS
Length	2,205 bp (734 aa)

Annotation

Category	3.4 other modification
Product	carbamoyltransferase
Product (GenBank)	O-carbamoyltransferase
Gene
Gene (GenBank)	asm21
EC number	2.1.3.-
Keyword	C-7 derivative N-glycosyl moiety
Note	The N-terminal position was modified from original INSDC entry.
Note (GenBank)
Reference	ACC Q8KUG9 PmId [12060743] The biosynthetic gene cluster of the maytansinoid antitumor agent ansamitocin from Actinosynnema pretiosum. (Proc Natl Acad Sci U S A. , 2002) [14624546] The post-polyketide synthase modification steps in the biosynthesis of the antitumor agent ansamitocin by Actinosynnema pretiosum. (J Am Chem Soc. , 2003) [22195559] Dual carbamoylations on the polyketide and glycosyl moiety by asm21 result in extended ansamitocin biosynthesis. (Chem Biol. , 2011) comment [PMID:12060743](2002) Actinosynnema pretiosum ssp. auranticum ATCC 31565のcosmid libraryから、ansamitocin生合成に必要な2つのgene clustersをクローニング。 <cluster I> Asm21(668aa) : O-carbamoyltransferase 配列解析から、ansamitocinの環状carbinolamide基を導入するputative functionを割り当てられている。 --- [PMID:14624546](2003) Actinosynnema pretiosumのansamitocin生合成gene clusterにある6genesの機能を、遺伝子不活化とmutantの化学分析によって調査。それらはそれぞれ halogenase (asm12), carbamoyltransferase (asm21), 20-O-methyltransferase (asm7), 3-O-acyltransferase (asm19), epoxidase (asm11), N-methyltransferase (asm10) をコードし、ansamitocin形成において6つのPKS後修飾ステップを担う。 asm21 deletion mutantは、19-chloroproansamitocinと20-O-methyl-19-chloroproansamitocinを蓄積。これらにはcarbamoyl基がないことから、asm21はcarbamoyltransferaseをコードする。 --- [PMID:22195559](2011) asm21不活化mutantにおいて4つの産物が蓄積。 20-O-methyl-19-chloroproansamitocin　←固形培地での主要産物 19-chloroproansamitocin　←液体培地での主要産物 14-beta-hydroxy-20-O-methyl-19-chloroisoproansamitocin 14-alpha-hydroxy-20-O-methyl-19-chloroisoproansamitocin Asm21のN末伸長とC末の保存が必要なことを、asm21 mutantの相補により確認。 E.coli発現したHis-tagged Asm21を用いて活性確認。 Asm21はasm21 mutantで蓄積したすべての産物をcarbamoyl化できた。また、kinetics測定結果から、20-O-methyl-19-chloroproansamitocinがAsm21の望まれた基質であると示された。固形培地で培養されたA. pretiosum ATCC 31565から新たに分離された4''-O-carbamoyl ansamitocinosideは、ansamitocin P-3のN-methyl基の代わりにamide nitrogenに付着したbeta-D-glucosyl部分を持っており、polyketide骨格と糖部分の両方でcarbamoyl化されている。このN-glucosyl部分にあるC-4 OH基のcarbamoylationも、Asm21が触媒することが確認された。触媒定数から、Asm21がpolyketide骨格よりもglucosyl部分のcarbamoylationを好むことが示された。

Sequence

>carbamoyltransferase [O-carbamoyltransferase]
MRTAVKPGPRRGVNRLWRKGLPLCSPAVEAATANGARVPYRPKWSPATRSPLVPPTRIGP
VTETMLVLGLNGNFSTAAEELVPGMLEFFFHDSSASLARDGELLAAVEEERYNRIKKTTR
FPSAAVRACFEETGLGPDDVDAVAFYFPEDHVDKVLGQLYCQSPAVPLRYSRDLVRDRLR
SELGWDLPAEKLHYVPHHLAHAMSSFGHSGFESALTVVFDGRGENASGTVYRIGPGGVES
LASYPVHRSLGFWYLFGTQLLGYGFGDEYKVMGLAPYGDPARYRSVFESLHSLGEGGEYE
LLGNVVTPNAFLPAMLDTGFAPRRKGEEFTQDHKDFAAALQETVERIALHVIRHWAERTG
ERALCFGGGVAHNSSLNGVILRSGLFDRVFVHPASHDAGAGTGAALAVEHRLTGRVPRVA
LRRADLGGGLGDERDVVLKLKGWDGFVELVHRAADLEDLVDTSARLLADGAVLGWARGRS
EFGPRALGSRSIVADPRPAANQTRINAMVKKRESYRPFAPVVTPDAAAEYFEIPDVEAEL
GFMSFVVPVRPEHRAGLGAVTHVDGTARVQVVTSTANPAFHRLVERFGELTGTPVLLNTS
FNNHAEPIVQTFEDVLTSFLTTELDYLVVGDSVVRRRPDFLGALDDAVIRFRPETRLVGR
VRFPVGGGRVEEHEVFLDYAEGPRKAISARAHGLLTRVDGKSAVAELVDGEVDDALRQEV
LDLWTDRYFTLGPV

>carbamoyltransferase [O-carbamoyltransferase]
GTGCGGACAGCAGTGAAACCAGGGCCTCGCCGGGGTGTCAATCGCCTGTGGCGCAAGGGA
TTACCGCTTTGTTCGCCAGCCGTGGAAGCGGCAACTGCCAACGGCGCCCGCGTGCCCTAC
CGTCCGAAGTGGAGTCCCGCGACCCGGTCTCCGCTCGTCCCTCCCACACGGATTGGCCCG
GTGACAGAGACCATGCTCGTGCTCGGCCTGAACGGCAACTTCTCGACCGCCGCCGAGGAG
CTGGTGCCGGGGATGCTGGAGTTCTTCTTCCACGACTCGTCGGCGAGCCTGGCGCGCGAC
GGCGAGCTGCTGGCCGCCGTGGAGGAGGAGCGGTACAACCGGATCAAGAAGACCACCCGG
TTCCCCAGCGCGGCCGTGCGGGCCTGCTTCGAGGAGACCGGGCTGGGGCCCGACGACGTG
GACGCGGTGGCGTTCTACTTCCCCGAGGACCACGTGGACAAGGTGCTCGGCCAGCTCTAC
TGCCAGAGCCCCGCCGTGCCGCTGCGGTACTCGCGCGACCTGGTGCGCGACCGGCTGCGC
AGCGAGCTGGGCTGGGACCTGCCCGCGGAGAAGCTGCACTACGTGCCGCACCACCTGGCG
CACGCGATGTCCTCCTTCGGGCACTCCGGGTTCGAGTCGGCGCTGACGGTCGTGTTCGAC
GGCCGGGGGGAGAACGCGTCCGGGACCGTCTACCGGATCGGGCCCGGCGGGGTCGAGTCG
CTGGCCTCGTACCCCGTGCACCGGTCGCTGGGGTTCTGGTACCTGTTCGGCACGCAGCTG
CTCGGCTACGGCTTCGGCGACGAGTACAAGGTGATGGGGCTGGCGCCCTACGGCGACCCG
GCCCGCTACCGGTCGGTGTTCGAGTCGCTGCACTCGCTGGGCGAGGGCGGCGAGTACGAG
CTGCTGGGCAACGTGGTCACGCCCAACGCCTTCCTCCCCGCGATGCTCGACACCGGGTTC
GCGCCGCGCCGCAAGGGCGAGGAGTTCACCCAGGACCACAAGGACTTCGCCGCCGCGCTG
CAGGAGACCGTGGAGCGGATCGCGCTGCACGTGATCCGGCACTGGGCCGAGCGGACCGGT
GAGCGCGCGCTGTGCTTCGGCGGCGGGGTCGCGCACAACTCCAGCCTCAACGGGGTGATC
CTGCGGTCGGGGCTGTTCGACCGGGTGTTCGTGCACCCCGCCTCGCACGACGCGGGCGCC
GGGACCGGGGCCGCCCTGGCGGTGGAGCACCGGCTGACCGGGCGGGTGCCGCGCGTGGCG
CTGCGCAGGGCGGACCTCGGTGGTGGGCTCGGGGACGAGCGGGACGTCGTGCTCAAGCTC
AAGGGCTGGGACGGGTTCGTCGAGCTGGTGCACCGGGCGGCGGACCTGGAGGACCTGGTG
GACACCTCGGCCCGGCTCCTCGCGGACGGCGCGGTGCTCGGGTGGGCGCGCGGGAGGTCG
GAGTTCGGGCCGCGCGCGCTGGGCAGCCGCAGCATCGTCGCCGATCCCCGGCCCGCCGCG
AACCAGACCAGGATCAACGCGATGGTGAAGAAGCGGGAGAGCTACCGGCCGTTCGCGCCC
GTGGTCACCCCCGACGCCGCCGCCGAGTACTTCGAGATCCCGGACGTCGAGGCCGAGCTG
GGGTTCATGTCGTTCGTGGTGCCCGTGCGGCCCGAGCACCGGGCCGGGTTGGGCGCGGTG
ACCCACGTGGACGGCACCGCGCGGGTGCAGGTGGTGACCTCGACGGCCAACCCGGCGTTC
CACCGGCTGGTGGAGCGGTTCGGCGAGCTGACCGGCACGCCGGTGCTGCTGAACACCTCG
TTCAACAACCACGCCGAGCCGATCGTGCAGACCTTTGAGGACGTGCTGACCAGCTTCCTG
ACCACCGAGCTGGACTACCTGGTGGTCGGCGACTCGGTGGTCCGCAGGCGCCCGGACTTC
CTGGGCGCGCTGGACGACGCGGTGATCCGGTTCCGCCCCGAGACCAGGCTGGTGGGCCGG
GTGCGGTTCCCGGTCGGTGGCGGTCGGGTGGAGGAGCACGAGGTCTTCCTGGACTACGCG
GAGGGGCCGCGCAAGGCGATCTCGGCGCGGGCGCACGGGCTGCTGACGCGGGTGGACGGG
AAGAGCGCGGTGGCCGAACTGGTGGACGGCGAGGTGGACGACGCCCTCCGACAGGAGGTC
CTCGACCTGTGGACCGACCGGTACTTCACGCTGGGGCCTGTTTAG

Feature

BLASTP Database:UniProtKB:2011_09	show BLAST table
InterPro Database:interpro:38.0	IPR003696 Carbamoyltransferase (Family) PF02543 CmcH_NodU
SignalP	No significant hit
TMHMM	No significant hit

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