Salino3_00300 : CDS information

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Organism
StrainXM211
Entry nameSalinomycin
Contig
Start / Stop / Direction100,004 / 99,543 / - [in whole cluster]
100,004 / 99,543 / - [in contig]
Locationcomplement(99543..100004) [in whole cluster]
complement(99543..100004) [in contig]
TypeCDS
Length462 bp (153 aa)
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Category3.4 other modification
Productputative epoxide hydrolase/cyclase
Product (GenBank)putative epoxide hydrolase
Gene
Gene (GenBank)slnBIII
EC number
Keyword
Note
  • Belongs to polyether epoxide hydrolase(PEH)-B group.
Note (GenBank)
  • SlnBIII
Reference
ACC
PmId
[22156425] Cloning and characterization of the polyether salinomycin biosynthesis gene cluster of Streptomyces albus XM211. (Appl Environ Microbiol. , 2012)
comment
polyetherに特異的なepoxidaseの配列に基づいた縮重プライマーを用いてStreptomyces albus XM211からsalinomycin(sln)生合成gene clusterを同定。

SlnBIII (153aa) : Epoxide hydrolase

slnBII と slnBIII はputative epoxide hydrolase genesであり、8bpのオーバーラップがある。

slnBII, slnBIII mutantではsalinomycin非検出。
slnBI mutantと違って、retention timeの短い新規ピークあり。

提唱されているsalinomycin生合成経路において、SlnBII と SlnBIII はepoxide-opening と閉環反応に割り当てられている。
Related Reference
ACC
H1ZZV0
NITE
Salino_01080
PmId
[22076845] A late-stage intermediate in salinomycin biosynthesis is revealed by specific mutation in the biosynthetic gene cluster. (Chembiochem. , 2012)
comment
配列は[H6D586]と全く同じ。株違い。

monC gene-based hybridisation probeを使って、Streptomyces albus DSM 41398からsalinomycin(sal)生合成gene clusterを同定。

salBII (153aa) : epoxide hydrolase/cyclase

MonB-like epoxide hydrolasesは、他のpolyether gene clusterで1〜2つコードされるのに対し、sal clusterでは3つある。このうちsalBI と salBII を一緒に削除してもsalinomycin産生量に変化なし。
残るSalBIII がこれらの欠損を代償するかどうかは確認されていない。
ACC
B6ZK72
NITE
Lasal_00210
PmId
[18710235] Epoxide hydrolase Lsd19 for polyether formation in the biosynthesis of lasalocid A: direct experimental evidence on polyene-polyepoxide hypothesis in polyether biosynthesis. (J Am Chem Soc. , 2008)
[21375229] Enzymatic epoxide-opening cascades catalyzed by a pair of epoxide hydrolases in the ionophore polyether biosynthesis. (Org Lett. , 2011)
[22388816] Enzymatic catalysis of anti-Baldwin ring closure in polyether biosynthesis. (Nature. , 2012)
comment
Blast 2nd, id60%, 3e-41(C-term) > id36%, 3e-16(N-term)
Streptomyces lasaliensis_lsd19
Epoxide hydrolase

---
[PMID:18710235](2008)
Lsd19をE.coliにて発現、クローニング、精製し活性を見ている。
incubationによりsingle deastereomerである6-endo-tet cyclization productを産生。trichloroacetic acidでbisepoxideを処理すると5-exo-tet cyclization modeを介してisolasalocid Aを産生する。

---
[PMID:21375229](2011)
site-directed mutagenesis, domain dissection analysisにより機能解析をしている。
D170A,E197Aでは一つ目のtetrahydrofuran環の形成で止まった化合物ができる。
lsd19A(N-term domain): 5-exo cyclization (bisepoxyprelasalocid A -> monocyclized intermediate)
lsd19B(C-term domain): 6-endo cyclization (monocyclized intermediate -> lasalocid A)

---
[PMID:22388816](2012)
結晶構造解析、および、触媒メカニズムの予測を行っている。
Lsd19Bの酵素活性中心における重要なアミノ酸はH146,D170,E197,Y251を挙げている。

polyether epoxide hydrolaseについてまとめて解析あり(構造モデリングと配列alignment)。
配列alignmentから、Lsd19A(N末)に似たPEH-AとLsd19B(C末)に似たPEH-Bに分類される。
Nigericinのような長めの基質で働くPEH-AはC末に余剰領域あり。

構造モデリングで、PEH-Aは深いbinding pocketが見られ、internal cyclic ethersの形成を担うとされている。PEH-Bは浅いbinding pocketが見られ、terminal cyclic ethersの形成を担うとされている。

NanI のN末, MonBI, NigBI はLsd19Bに似たPEH-Bに分類されている。
ACC
Q846W7
NITE
Monen_00240
PmId
[16632258] Evidence for the role of the monB genes in polyether ring formation during monensin biosynthesis. (Chem Biol. , 2006)
comment
Blast 5th, id43%, 3e-28
Streptomyces cinnamonensis_monBI
Probable monensin biosynthesis isomerase

monBI and/or monBII genesの削除は、monensins A and Bの代わりにC-3-O-demethylmonensinsと多くのminor components(C-9-epi-monensin Aを含む)のmixtureを産生する株をもたらす。これら全てのminor componentsは、酸の処理によってmonensinsに効率的に変換された。
MonBI- and MonBII-欠損mutantsの産物のパターンは同一。

よってepoxide開環と随伴性のpolyether環形成がMonB enzymesによって触媒されると示唆される。
これに一致して、MonB-type enzymesの構造がRhodococcus erythropolis由来limonene-1,2-epoxide hydrolaseの構造に近しく似ていることがhomology modelingで示された。

MonBI and MonBIIがheterodimerを形成し、epoxide hydrolase/cyclaseとして働くことが提唱されている。
MonBI, MonBII それぞれの役割はわかっていない。

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selected fasta
>putative epoxide hydrolase/cyclase [putative epoxide hydrolase]
MLDEAALKELILEHTRRVNAGDVEGLLKLYSPEVRFEDPVGAGAQQGHEALRAHATGAVT
SNAVEIAGRPVAAQDGLHAAVPVTATMDYLPLGPVLTRYGVLPTPADPTGQRMQFQFLMV
IRAGADGLIEDMRAYWGTSDVALVDAAQGGAHA
selected fasta
>putative epoxide hydrolase/cyclase [putative epoxide hydrolase]
ATGCTGGATGAGGCGGCACTGAAAGAGCTGATCCTCGAACACACCAGGCGGGTCAATGCC
GGTGATGTCGAGGGCCTGCTCAAGCTGTACTCCCCCGAGGTCCGTTTCGAGGATCCGGTC
GGAGCCGGCGCCCAGCAGGGCCACGAGGCGCTGCGTGCCCATGCCACCGGCGCGGTGACC
AGCAACGCCGTGGAGATCGCGGGCAGGCCGGTGGCCGCCCAGGACGGGCTGCACGCCGCG
GTCCCGGTCACCGCGACGATGGACTACCTGCCGCTGGGGCCGGTCCTCACCCGGTACGGG
GTGCTGCCCACGCCGGCCGATCCCACCGGCCAGCGCATGCAATTCCAGTTCCTGATGGTG
ATCCGGGCGGGCGCCGACGGCCTCATCGAGGACATGCGGGCCTATTGGGGCACGAGTGAT
GTCGCTCTCGTCGACGCGGCACAAGGAGGAGCACATGCTTGA

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BLASTP
Database:UniProtKB:2011_09
show BLAST table
InterPro
Database:interpro:38.0
IPR009959 Polyketide cyclase SnoaL-like domain (Domain)
 [15-130]  2.2e-11 PF12680
PF12680   SnoaL_2
SignalP
 [1-20]  0.081 Signal
Eukaryota   
 [1-36]  0.052 Signal
Bacteria, Gram-negative   
TMHMM No significant hit
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