Megalo_00110 : CDS information

Location

Organism	Micromonospora megalomicea subsp. nigra
Strain	NRRL 3275 (=NBRC 14744)
Entry name	Megalomicin
Contig	AF263245
Start / Stop / Direction	11,424 / 10,483 / - [in whole cluster] 11,424 / 10,483 / - [in contig]
Location	complement(10483..11424) [in whole cluster] complement(10483..11424) [in contig]
Type	CDS
Length	942 bp (313 aa)

Annotation

Category	2.3 modification addition of sugar moiety
Product	dTDP-4-keto-6-deoxyhexose C-4 ketoreductase
Product (GenBank)	TDP-4-keto-6-deoxyhexose 4-ketoreductase
Gene
Gene (GenBank)	megBIV
EC number
Keyword	mycarose
Note
Note (GenBank)
Reference	ACC Q9F831 PmId [10972798] Biosynthesis of the anti-parasitic agent megalomicin: transformation of erythromycin to megalomicin in Saccharopolyspora erythraea. (Mol Microbiol. , 2000) [15870344] Production of the potent antibacterial polyketide erythromycin C in Escherichia coli. (Appl Environ Microbiol. , 2005) [20418422] TDP-L-megosamine biosynthesis pathway elucidation and megalomicin a production in Escherichia coli. (Appl Environ Microbiol. , 2010) comment [PMID: 10972798](2000) megalomicin (meg) biosynthetic gene clusterの報告。 megBIV: 4-ketoreductase MegBIVはerythromycin clusterのEryBIVに似ているのでputative 4-ketoreductases。 EryBIVは(NDP-L-)mycarose生成に関与する[PMID: 9353926]。 --- [PMID: 15870344](2005) G-1-P → dTDP-L-mycaroseの変換に必要な7つの遺伝子(megDIV, BII, M, L, BVI, BIV, BIII)とmycarosyltransferase_megBV、C-6 hydroxylase_megFを含んだmycarose operon(pKOS452-53e)を構築し、E.coliで発現。LC/MS解析により、6-deoxyerythronolide Bから3-mycarosyl-erythronolide Bが得られることを確認。 --- [PMID: 20418422](2010) 異なる遺伝子セットを含んだオペロンによってE.coliで産生されたdTDP-sugar中間体のLC/MS/MS analysis。 meg clusterには2つの4-ketoreductase候補MegDV, MegBIVがある。MegBIVは既にmycarose生合成に関与することがすでに実証されている(←Refは[PMID: 15870344])が、この論文でもその使い分けが確認されている。 pM20(論文本文にはpM1と書いてあるけど20じゃないとおかしい)にmegDV or megBIVのどちらかを加えた2つの異なる発現ベクター(pM21 and pM22)が構築、発現され、L-megosamineの産生がLC/MS/MSによって評価された。L-megosamineはmegDVを含むほうでは検出されたが、megBIVを含むほうではされなかった。よって、MegBIVはL-mycaroseルートで、MegDVはL-megosamine経路で、特異的に働く4-ketoreductase。

Sequence

>dTDP-4-keto-6-deoxyhexose C-4 ketoreductase [TDP-4-keto-6-deoxyhexose 4-ketoreductase]
MTRHVTLLGVSGFVGSALLREFTTHPLRLRAVARTGSRDQPPGSAGIEHLRVDLLEPGRV
AQVVADTDVVVHLVAYAAGGSTWRSAATVPEAERVNAGIMRDLVAALRARPGPAPVLLFA
STTQAANPAAPSRYAQHKIEAERILRQATEDGVVDGVILRLPAIYGHSGPSGQTGRGVVT
AMIRRALAGEPITMWHEGSVRRNLLHVEDVATAFTAALHNHEALVGDVWTPSADEARPLG
EIFETVAASVARQTGNPAVPVVSVPPPENAEANDFRSDDFDSTEFRTLTGWHPRVPLAEG
IDRTVAALISTKE

>dTDP-4-keto-6-deoxyhexose C-4 ketoreductase [TDP-4-keto-6-deoxyhexose 4-ketoreductase]
ATGACAAGACATGTCACACTTCTCGGCGTTTCTGGATTCGTCGGAAGCGCCCTTCTTCGC
GAATTTACCACACACCCTCTCCGACTGCGGGCCGTCGCGCGCACCGGGTCTCGCGACCAG
CCACCAGGCAGCGCCGGGATCGAGCACCTTCGAGTCGACCTGCTCGAACCCGGCCGGGTC
GCGCAGGTCGTCGCCGACACCGACGTCGTCGTGCATCTGGTCGCCTACGCCGCCGGCGGG
TCGACCTGGCGCAGCGCCGCCACGGTGCCCGAGGCCGAACGCGTCAACGCGGGCATCATG
CGCGACCTCGTCGCCGCGCTGCGGGCAAGACCCGGACCCGCGCCGGTGCTCCTGTTCGCC
AGCACCACCCAGGCCGCGAACCCCGCCGCCCCCAGCCGGTACGCCCAGCACAAGATCGAG
GCCGAGCGGATCCTGCGTCAGGCCACCGAGGACGGGGTCGTCGACGGGGTGATCCTGCGC
CTGCCCGCGATCTACGGCCACAGCGGCCCGTCGGGGCAGACCGGCCGGGGTGTCGTCACC
GCCATGATCCGGCGAGCCCTCGCCGGTGAGCCGATCACGATGTGGCACGAGGGCAGCGTG
CGCCGCAACCTCCTGCACGTCGAGGACGTGGCCACCGCGTTCACCGCCGCACTGCACAAC
CACGAGGCGCTGGTCGGCGACGTCTGGACGCCGAGCGCGGACGAGGCCCGACCCCTCGGC
GAGATCTTCGAGACCGTCGCCGCCAGCGTGGCACGTCAGACCGGCAACCCTGCGGTGCCC
GTCGTCAGCGTCCCTCCACCGGAGAACGCCGAGGCCAACGACTTCCGCAGCGACGACTTC
GACTCCACCGAGTTCCGGACGCTGACCGGCTGGCACCCCCGGGTGCCGCTGGCCGAGGGC
ATCGACCGGACCGTTGCCGCCCTCATCTCGACCAAGGAGTGA

Feature

BLASTP Database:UniProtKB:2011_09	show BLAST table
InterPro Database:interpro:38.0	IPR001509 NAD-dependent epimerase/dehydratase (Domain) PF01370 Epimerase IPR016040 NAD(P)-binding domain (Domain) G3DSA:3.40.50.720 NAD(P)-bd
SignalP	Bacteria, Gram-negative Bacteria, Gram-positive Eukaryota
TMHMM	No significant hit

Megalo_00100 Megalo_00120