Griseo_00210 : CDS information

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Organism
StrainJP95
Entry nameGriseorhodin A
Contig
Start / Stop / Direction22,699 / 24,288 / + [in whole cluster]
22,699 / 24,288 / + [in contig]
Location22699..24288 [in whole cluster]
22699..24288 [in contig]
TypeCDS
Length1,590 bp (529 aa)
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Category3.1 modification hydroxylation
Productputative hydroxylase
Product (GenBank)putative FAD-dependent monooxygenase GrhO8
Gene
Gene (GenBank)grhO8
EC number
Keyword
Note
Note (GenBank)
Reference
ACC
PmId
[12323376] A gene cluster from a marine Streptomyces encoding the biosynthesis of the aromatic spiroketal polyketide griseorhodin A. (Chem Biol. , 2002)
[19175308] Cleavage of four carbon-carbon bonds during biosynthesis of the griseorhodin a spiroketal pharmacophore. (J Am Chem Soc. , 2009)
comment
[PMID:12323376](2002)
griseorhodin A生合成gene clusterのクローニング、シークエンス、異種性発現。

GrhO8: FAD-dependent monooxygenase
配列解析のみ。

GrhO5, GrhO8 and GrhO9は芳香族systemsのhydroxylationsに関連したFAD-dependent monooxygenasesに有意な相同性あり。
GrhO5, GrhO8, and/or GrhO9が5つのring hydroxylationsをたぶん触媒する。

---
[PMID: 19175308](2009)
grhO8: FAD-dependent oxygenase

grhO8 mutantはC26H20O9のcompound16を蓄積。
この化合物は中間体collinone(O12)よりOがずっと少ないので、生合成経路の上流に割り当てられる。
GrhM→GrhO8→GrhO9
Related Reference
ACC
Q8KSX0
NITE
Griseo_00220
comment
Blast 2nd, id47%, 1e-117
grh cluster内homolog grhO9
ACC
Q8KSX7
NITE
Griseo_00150
comment
Blast 6th, id45%, 1e-101
grh cluster内homolog grhO5
ACC
Q2PWU9
PmId
[8830701] ( , )
comment
Blast 64th, id41%, 2e-94
Burkholderia sp. DNT_dntB
4-methyl-5-nitrocatechol monooxygenase

--
[PMID:8830701](1996)
4-methyl-5-nitrocatechol → 2-hydroxy-5-methylquinoneへのNO2基を除去を伴う変換を触媒する4-methyl-5-nitrocatechol monooxygenase DntBタンパクの分離、精製、シークエンス、活性測定。

--
[PMID:16751499](2006)
DntBは基質幅が狭いが、他の基質も受け入れるDntB M22L/L380Iを形成して活性をwildと比較している。
4-Methyl-5-nitrocatechol, 4-nitrocatechol, 4-nitrophenol, 3-methyl-4-nitrophenol を基質とした初速度測定をしている。
ACC
Q9L4Y1
NITE
Ello_00070
PmId
[11325225] Cloning, sequencing, and heterologous expression of the elmGHIJ genes involved in the biosynthesis of the polyketide antibiotic elloramycin from Streptomyces olivaceus Tu2353. (J Nat Prod. , 2001)
comment
Blast 92nd, id41%, 3e-88
Streptomyces olivaceus_elmG
Tcm B2 oxygenase

Elloramycin A産生に関連するcosmid clone 16F4からの遺伝子同定、配列解析とその遺伝子の異種性発現。

ElmG: tetracenomycin B2 oxygenase

elloramycinのaglycon 8-demethyltetracenomycin C (8-DMTC)は、tetracenomycin Cと8-OH基が違うだけ。よってElmGは、tetracenomycin(Tcm) B2 → 8-DMTCへの変換を担うと提唱されている。
この反応は、C-4, C-4a, C-12aでのtriple hydroxylation.

ElmGの基質として提唱されているTcmB2は入手不可能なので、ElmG酵素活性測定の基質にはTcmA2を使用。S.lividansで過剰発現、精製されたElmGは、TcmA2を同じ場所でtriple hydroxylationしたTcmCへと変換することをHPLC測定にて確認している。NADP or NADPHをelectron donorとして利用し、O2分子を必要とする。

8-DMTCがelloramycin aglyconeであることが確認されていることからTcmB2が直接triple hydroxylationされると判断し、基質名をTcmB2としている。
ACC
P39888
PmId
[8509339] ( , )
comment
Blast 90th, id39%, 1e-89
Streptomyces glaucescens_tcmG
Tetracenomycin polyketide synthesis hydroxylase tcmG(EC 1.14.13.-)

Streptomyces lividans におけるtcmGとtcmPの異種性発現と、E.coliでのtcmPの異種性発現から、

・tcmPがO-methyltransferaseとしてコードされ、tetracenomycin (TCM) EのC-9 COOH基のmethylationを触媒してTCM A2を得る。
・TcmGがTCM A2のpositions C-4, C-4a, and C-12aでのhydroxylationを担い、TCM Cを形成する。

ということを確立。
これらはTCM C生合成の最終2stepsである。

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selected fasta
>putative hydroxylase [putative FAD-dependent monooxygenase GrhO8]
MPVLIVGGGLTGLSAAVFLAHHGVRATLVERHPGASTHPKARAINPRTMELYRAVGMEER
VTAGRSPISGNTDLVHVETLAGAERVRMPNASVEDISRISPARWTLIDQNQLEPILRARA
EEVGVDLRFHTRLDAVTETADGVTATLTDVGTGGSTELRAAYVIAADGSRSPVRDLLSIG
SHGRGTLTNLVSFFFDADLEEPLRGRKIIAAYVNNPEVRGTIIPLDNDRKWVINVSFFPD
KGQSAEDFTPERCVELVRAAVGVPDLELTLDSVDMPAWDISARVADTFARGRFLVAGDAA
HVMPPTGAFGASTGIQDAYNLAWKLALVLADKAGPELLASYDAERRPVAEETVRQAMLRF
AVREGKQFQDVAKDLVDEMTMTFGYVYPAGAFTGEGAGAGNITEEPDKPSGRPGARAPHV
VIEGAHGPFSAVDLFPVGFTLLTAGASAPWAAAADAGRELGLVLQVRGVGAGGDYADTEG
TFTERYGVADGGAVLVRPDGVVAWRAGSAPEGDVAATVTGVLRRILALD
selected fasta
>putative hydroxylase [putative FAD-dependent monooxygenase GrhO8]
GTGCCCGTCCTCATCGTCGGCGGTGGCCTGACCGGGCTGTCCGCCGCCGTGTTCCTCGCC
CACCACGGGGTGCGGGCCACGCTCGTCGAGCGCCACCCCGGCGCCTCCACCCACCCCAAG
GCGCGGGCCATCAACCCGCGCACCATGGAGCTCTACCGCGCGGTGGGCATGGAGGAGCGC
GTCACGGCCGGCCGTTCGCCGATCTCCGGCAACACCGACCTGGTGCACGTCGAGACCCTC
GCCGGCGCCGAGCGGGTCCGCATGCCCAACGCCTCCGTCGAGGACATCAGCCGCATCAGC
CCGGCCCGGTGGACCCTGATCGACCAGAACCAGCTCGAACCCATCCTGCGCGCACGGGCC
GAGGAGGTCGGCGTCGACCTGCGCTTCCACACCCGGCTGGACGCCGTCACCGAGACCGCC
GACGGCGTCACCGCGACCCTCACCGACGTCGGGACCGGCGGTAGCACCGAACTGCGCGCC
GCGTACGTGATCGCCGCGGACGGCAGCCGCAGCCCGGTCCGCGACCTCCTCTCCATCGGC
TCCCACGGCCGCGGCACCCTCACCAACCTGGTCAGCTTCTTCTTCGACGCCGACCTGGAG
GAGCCGCTGCGCGGCCGGAAGATCATCGCCGCCTACGTCAACAACCCCGAGGTGCGCGGC
ACGATCATCCCGCTCGACAACGACCGCAAGTGGGTCATCAACGTCTCCTTCTTCCCCGAC
AAGGGCCAGAGCGCCGAGGACTTCACCCCGGAGCGCTGCGTCGAACTGGTCCGCGCCGCC
GTCGGCGTACCGGATCTGGAGCTGACCCTCGACTCGGTCGACATGCCCGCCTGGGACATC
TCTGCGCGGGTGGCGGACACCTTCGCCCGCGGCCGCTTCCTGGTGGCCGGGGACGCCGCG
CACGTGATGCCGCCCACCGGGGCCTTCGGCGCCAGCACCGGCATCCAGGACGCCTACAAC
CTGGCCTGGAAGCTCGCCCTCGTGCTGGCGGACAAGGCCGGGCCCGAGCTGCTCGCGAGC
TACGACGCGGAACGCCGCCCGGTCGCGGAGGAGACCGTCCGGCAGGCGATGCTGCGGTTC
GCGGTCCGCGAGGGCAAGCAGTTCCAGGACGTCGCCAAGGACCTGGTCGACGAGATGACG
ATGACCTTCGGCTACGTCTATCCGGCCGGCGCGTTCACCGGCGAGGGCGCCGGGGCCGGG
AACATCACCGAGGAGCCCGACAAGCCGAGCGGCCGCCCCGGCGCACGGGCCCCGCACGTC
GTGATCGAGGGCGCGCACGGGCCGTTCTCCGCGGTGGACCTCTTCCCGGTCGGCTTCACC
CTGCTCACCGCGGGCGCGTCCGCCCCCTGGGCGGCTGCGGCCGACGCGGGCCGGGAGCTG
GGCCTGGTCCTCCAGGTGCGCGGCGTCGGCGCGGGCGGCGACTACGCCGACACCGAGGGC
ACGTTCACGGAGCGCTACGGCGTCGCGGACGGCGGCGCGGTCCTGGTCCGCCCGGACGGG
GTGGTCGCCTGGCGCGCCGGGAGCGCCCCCGAGGGCGATGTCGCGGCGACGGTGACGGGC
GTCCTGCGGCGGATCCTCGCGCTGGACTGA

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BLASTP
Database:UniProtKB:2011_09
show BLAST table
InterPro
Database:interpro:38.0
IPR002938 Monooxygenase, FAD-binding (Domain)
 [2-356]  5.90000000000008e-100 PF01494
PF01494   FAD_binding_3
IPR003042 Aromatic-ring hydroxylase-like (Domain)
 [2-24]  2.99998750445706e-42 PR00420 [159-174]  2.99998750445706e-42 PR00420 [290-305]  2.99998750445706e-42 PR00420 [305-321]  2.99998750445706e-42 PR00420 [323-341]  2.99998750445706e-42 PR00420 [341-357]  2.99998750445706e-42 PR00420
PR00420   RNGMNOXGNASE
SignalP
 [1-26]  0.993 Signal
Eukaryota   
 [1-26]  0.37 Signal
Bacteria, Gram-negative   
TMHMM No significant hit
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