Bacillus cereusのセレウリド合成酵素(CRS)遺伝子の検出

供試菌株

NBRCで保有するBacillus cereus 16株（表1）

方法

1. １．各菌株指定の液体培地（802培地）で1日間培養
2. ２．DNAを抽出
3. ３．供試菌株のDNA、ポジティブコントロールとしてキット付属のPositive control Template（CRSおよびLE）、ネガティブコントロールとして滅菌水をそれぞれ鋳型としてPCR反応（PCR条件は製品添付の説明書に従っています）
4. ４．3%アガロースゲルで電気泳動後、エチジウムブロマイドで染色

使用キット

Bacillus cereus (CRS gene) PCR Detection Kit
（製品コード：RR132A、タカラバイオ株式会社）

結果

PCRで得られるセレウリド合成酵素（CRS）遺伝子の増幅産物は426 bpで、試験したNBRC株16株の全株において増幅産物は得られず、セレウリド合成酵素（CRS）遺伝子は保持していないことを確認しました。

全てのサンプルのPCR反応液はインターナルコントロール（I.C.）を含みますが、LEまたはCRS遺伝子由来の増幅産物が確認されたサンプルでは、インターナルコントロール由来の増副産物が確認できない場合があるとされています。
　試験は2回行い、同一の結果を得ています。

表1. レーン番号と供試菌株

1	NBRC 3001
2	NBRC 3002
3	NBRC 3003
4	NBRC 3131
5	NBRC 3132
6	NBRC 3457
7	NBRC 3466
8	NBRC 3514
9	NBRC 3563
10	NBRC 3836
11	NBRC 13494
12	NBRC 13597
13	NBRC 13690
14	NBRC 15305
15	NBRC 103938
16	NBRC 109892
M	マーカー
P1	ポジティブコントロール（CRS;セレウリド合成酵素遺伝子）
P2	ポジティブコントロール（LE;レシチナーゼ遺伝子）
N	ネガティブコントロール（I.C.;インターナルコントロール）

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